Mitrovske zadušnice obeležavaju se u subotu uoči praznika Svetog velikomučenika Dimitrija, odnosno Mitrovdana, koji se svake godine proslavlja 8. novembra.
Zadušnice su dani kada se vernici posebno mole za pokoj duša preminulih. U pravoslavnim hramovima služe se Sveta liturgija i parastos, tokom kojeg se sveštenstvo moli za upokojene pravoslavne hrišćane. Vernici mogu da predaju imena svojih preminulih članova porodice kako bi bila pomenuta u molitvi.
Nakon bogosluženja, vernici odlaze na groblja, gde se pale sveće i obavlja pomen na grobovima upokojenih. Ukoliko nisu u mogućnosti da posete grobove svojih najbližih, molitveni pomen mogu da obave u hramu.
Prema pravoslavnom učenju, molitva za upokojene predstavlja izraz hrišćanske ljubavi koja ne prestaje smrću. Zadušnice su zato prilika da se vernici kroz molitvu sete svojih bližnjih i pomole za pokoj njihovih duša.
U crkvenoj praksi za Zadušnice se priprema kuvano žito, odnosno koljivo, koje simbolizuje veru u vaskrsenje i večni život, kao i sveće koje se pale u spomen na preminule.
Mitrovske zadušnice su jedne od četiri velike zadušne subote u pravoslavnom kalendaru. Pored jesenjih, obeležavaju se i zimske, letnje odnosno Duhovske, kao i Miholjske zadušnice.